淺談動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑的主要特點及操作步驟
2020-12-15 1735
動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑通過納米技術(shù)合成，通過物理作用與核酸結(jié)合，濃縮包裹核酸，從而保護核酸免受免疫系統(tǒng)破壞，同時增強核酸進入細胞核中表達。不含任何動物來源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應(yīng)，不影響動物和器官組織的功能，可以多次在同一動物注射。
于動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染，可直接轉(zhuǎn)染RNA到動物體內(nèi)進行：
1、基因治療的動物體內(nèi)研究；
2、RNA干擾的動物體內(nèi)研究；
3、蛋白功能的動物體內(nèi)研究。
動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑主要特點：
1、3天可以得到結(jié)果，核酸+轉(zhuǎn)染試劑，注射動物，完成轉(zhuǎn)染。
2、肝、腎、心、肺，血液系統(tǒng)，神經(jīng)系統(tǒng)，皮膚…成功應(yīng)用。
3、可方便、快捷更換不同的小片斷RNA進行動物試驗。
4、方法先進，拋棄病毒，眾多實驗室應(yīng)用，穩(wěn)定可靠。
5、比使用病毒節(jié)省90%以上費用，時間縮短到3天。
動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑操作步驟：
1、傳代細胞準(zhǔn)備細胞在轉(zhuǎn)染前24h傳代,待細胞密度達50%～60%滿底時即可進行轉(zhuǎn)染。加入沉淀前3～4h，用9ml*培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞。
2、DNA沉淀液的準(zhǔn)備首先將質(zhì)粒DNA用乙醇沉淀（10～50μg/10cm平板），空氣中晾干沉淀，將DNA沉淀重懸于μL無菌水中，加50μL2.5mol/LCaCl2。
3、用吸管在500μL2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液，同時用另一吸管吹打溶液，直至DNA-CaCl2溶液滴完，整個過程需緩慢進行，至少需持續(xù)1～2min。
4、室溫靜置30min,出現(xiàn)細小顆粒沉淀。
5、將沉淀逐滴均勻加入10cm平板中，輕輕晃動。
6、在標(biāo)準(zhǔn)生長條件下培養(yǎng)細胞4～16h。除去培養(yǎng)液，用5ml1×HeBS洗細胞2次，加入10ml*培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞。收集細胞或分入培養(yǎng)皿中選擇培養(yǎng)。
